Variación de perfiles genéticos obtenidos por PCR con y sin extracción de ADN a partir de manchas de sangre

Abstract

ABSTRACT: The PCR without extraction is a key tool in forensic investigation, being a good option when samples with small amounts or degraded DNA are available. The objective of this study was to compare genetic profiles obtained by PCR using: i) DNA samples extracted using Chelex® 100, ii) DNA samples extracted using an FTA purification reagent, and iii) samples without extraction using the commercial kits AmpFLSTR® Identifiler®, routinely employed in the laboratory IdentiGEN of the University of Antioquia. Blood stains were collected in FTA cards Genecard WhatmanTM, chromatography paper, and in filter papers. PCR without extraction was performed using the buffers EzwayTM, PCRboostTM, STRboostTM, and Buffer 5X Colorless Go Taq® Flexi. The pro les were obtained by capillary electrophoresis. The results show that, using the above-mentioned buffers, all STR markers were amplified, for samples collected in the three different types of support. In conclusion, the PCR without extraction, apart from reducing the cost and time needed for processing the samples, it allows obtaining genetic pro les that meet the quality criteria established by the laboratory, in a more efficiently way, since DNA extraction and purification steps are eliminated. Key words: DNA extraction, forensic genetics, PCR without extraction.

RESUMEN: La PCR sin extracción es una herramienta clave en investigaciones forenses, tratándose de una de las opciones a elegir cuando se tienen muestras con baja cantidad o calidad del ADN. El objetivo de este estudio fue determinar si hay diferencias entre los per les genéticos obtenidos por PCR i) en muestras de ADN extraídas con Chelex® 100, ii) en muestras de ADN obtenidas con el reactivo de purificación de muestras en tarjetas FTA, y iii) por la PCR muestras sin extracción, empleando el kit comercial AmpFLSTR® Identifiler®, utilizado de rutina en el laboratorio IdentiGEN de la Universidad de Antioquia. Manchas de sangre almacenadas en tarjetas FTATM Genecard WhatmanTM, papel de Cromatografía y papel filtro, se amplificaron por PCR sin extracción utilizando los buffers EzwayTM, PCRboostTM, STRboostTM y Buffer 5X Colorless Go Taq® Flexi. Los perfiles obtenidos se analizaron por medio de electroforesis capilar. Los resultados muestran que con los buffers utilizados se obtiene la amplificación de todos los marcadores STRs de las muestras almacenadas en los tres diferentes soportes. Esto permite concluir, que utilizando la PCR sin extracción, además de reducirse los costos y el tiempo de procesamiento de las muestras, se logra obtener per les genéticos que cumplan los criterios de calidad establecidos por el laboratorio, generando resultados de manera más eficiente al no ser necesario realizar la extracción y puri cación del ADN. Palabras clave: PCR sin extracción, extracción de ADN, genética forense.