Evaluación in vitro del efecto virucida e interacciones in sílico del Lupeol contra los cuatro serotipos del virus Dengue

Abstract

RESUMEN: Introducción: No se encuentra hasta el momento disponible una terapia antiviral o vacuna específica contra el virus del Dengue (DENV). Debido a esto y a la necesidad de continuar con la búsqueda de agentes antivirales contra este virus, el objetivo de este trabajo fue evaluar in vitro el efecto virucida e interacciones in silico del Lupeol, aislado de la planta de la Región Caribe colombiana Chenopodium ambrosioides, contra los cuatro serotipos del DENV. Metodología: Mediante la técnica de MTT se evaluó la viabilidad de células VERO en presencia de Lupeol (7,3- 233,6 uM). Se evaluó el efecto virucida del Lupeol contra DENV-1 a DENV-4 mediante el ensayo TRANS-tratamiento en células VERO, para lo cual se prepararon mezclas 1:1 de Lupeol (7,3 uM) y de cada serotipo de DENV (MOI:1). Se utilizó Heparina como control positivo de inhibición y la cepa DENV-2/16681 como cepa de control de inhibición del Lupeol. Finalmente, se recolectaron los sobrenadantes para cuantificar las partículas virales infecciosas y copias genómicas por ensayo de plaqueo y RT-qPCR , respectivamente. Para establecer diferencias nucleotídicas y aminoacídicas entre los serotipos de DENV utilizados en este estudio, se hizo secuenciación por Sanger para el gen que codifica para la proteína de Envoltura (E) y alineamiento de las secuencias por el método de Clustal W. Además, se evaluó la interacción del Lupeol con la proteína E de DENV 1-4 mediante docking molecular. Las diferencias estadísticas se identificaron usando t-Student o U de MannWhitney. Resultados: La viabilidad celular en VERO fue del 94,0 % a concentraciones de 7,3 µM del Lupeol. El porcentaje de infección en número de copias genómicas fue del 139,6% para DENV-1, 188,2% para DENV-2/16803, 15,6% para DENV-2/16681, 142,7 % para DENV-3 y DENV-4 126,5% respecto al control sin tratamiento. Por otra parte, el porcentaje de infección del número de partículas infecciosas fue del 91,3% para DENV-1, 16,2% para DENV-2/16803, 64,85 % para DENV-2/1668, del 64,8 % para DENV-3 y 35,0% para DENV-4 respecto al control de sobrenadantes de células VERO infectadas sin tratamiento. Se identificaron diferencias y sustituciones en la naturaleza de los aminoácidos que podrían estar relacionadas con el efecto antiviral del Lupeol diferencial para cada serotipo. En los resultados de Docking molecular se obtuvieron energías de unión favorables (-6,8 kcla/mol y 6,9 Kcal/mol) entre el Lupeol y la proteína E de los cuatro serotipos de DENV. Conclusiones: El efecto antiviral del Lupeol usando la estrategia de TRANS-tratamiento fue dependiente de la cepa y serotipo viral. Lupeol inhibió el número de partículas virales infecciosas de DENV-2/16803, DENV-3 y DENV-4.