Expresión de IRF6, TLR2 y citocinas en liquen plano oral: una evaluación a partir de la estandarización de herramientas con potencial diagnóstico

Abstract

RESUMEN: El liquen plano oral (LPO) es una enfermedad inflamatoria que cuenta con la participación tanto de componentes innatos como adaptativos del sistema inmune. Aunque no se identifica un factor causal en LPO, se ha asociado una hipersensibilidad celular con su fisiopatología. Además, la cronicidad de la enfermedad podría causar su transformación maligna. Los receptores tipo toll (TLRs) tiene un rol importante en la respuesta inmune innata dada en el establecimiento de LPO. Una familia de factores de transcripción, la familia de Factores Reguladores de Interferón (IRF), específicamente, el patrón de expresión del factor regulador de interferón 6 (IRF6) se postula como una molécula útil en determinar el pronóstico de LPO, como componente clave de la señalización de TLRs, vía TLR2-IRAK1, que podría impartir especificidad a las respuestas inmunes posteriores por medio de la producción de citocinas en los queratinocitos orales afectados en LPO. Por lo tanto, inicialmente se planteó un modelo sobre el proceso inflamatorio en LPO, enfatizado en el papel de los queratinocitos orales. Esta tesis de maestría tuvo como objetivos evaluar la expresión de IRF6, TLR2 y de las citocinas IFNγ, IL1β, IL6, IL10 y TNFα, como principales actores del modelo propuesto. Para alcanzar estos objetivos, se realizó la estandarización y validación de la citología oral en base líquida para el análisis celular y molecular de los queratinocitos orales con la medición de la expresión de TLR2 e IRF6 mediante ensayos de qPCR; en los que se observó una variación en la expresión de TLR2 e IRF6 entre los pacientes con LPO estando levemente disminuidas respecto al control. Y se realizó recolección de saliva no estimulada para determinar la concentración de las citocinas mencionadas mediante un ensayo de Luminex, en el que se identificó una mayor expresión de IFNγ e IL10. Estos hallazgos permiten postular un mecanismo de compensación inflamatorio provocado por el incremento de IFNγ, y abren las puertas para nuevas investigaciones que incluyan un mayor número de pacientes de LPO categorizados por tipo de lesión y tiempo aproximado de diagnóstico que permitan validar el modelo inflamatorio propuesto y pueda ser aplicado a otros desordenes potencialmente malignos o cáncer y así avanzar en sus diagnósticos y pronósticos.

ABSTRACT: Oral lichen planus (OLP) is a chronic inflammatory disease with a strong immune mechanism involved. And this bilaterally affects the stratified squamous epithelium of the oral mucosa. Although no causal factor is identified in OLP, cellular hypersensitivity has been associated with its pathophysiology. In addition, the chronicity of the disease could cause its malignant transformation. Toll-like receptors (TLRs) play an important role in the innate immune response given in the onset of OLP. A family of transcription factors, the Interferon Regulatory Factors (IRF), specifically, the expression patterns of interferon regulatory factor 6 (IRF6) is postulated as a useful molecule in determining the prognosis of OLP, as a key component of TLR signaling, via TLR2-IRAK1, could impart specificity to subsequent immune responses through the production of cytokines in the LPO- affected oral keratinocytes. Therefore, a model of the inflammatory process in OLP, emphasizing on the role of oral keratinocytes, was proposed initially. This master's thesis aimed to evaluate the expression of IRF6, TLR2 and the cytokines IFNγ, IL1β, IL6, IL10 and TNFα as main actors of the proposed model. In order to reach these aims, the standardization and validation of the liquid-based oral cytology for the cellular and molecular analysis of oral keratinocytes was carried out to measure the expression of TLR2 and IRF6 through qPCR assays, in which a differential expression was observed for TLR2 and IRF6 in OLP patients being slightly lower when compared to the control group. And, unstimulated saliva was collected to determine the concentration of the mentioned cytokines using a Luminex assay, in which a higher expression of IFNγ and IL10 was identified. These findings allow the postulation of an inflammatory compensation mechanism caused by the increase of IFNγ. These results open the doors for new investigations that include a greater number of OLP patients categorized by type of injury and approximate time of diagnosis that allow the validation of the proposed inflammatory model and can be applied to other potentially malignant disorders or cancer and therefore advance in their diagnoses and prognosis.