Implementación de un protocolo de extracción de fibroblastos de tejido humano en el laboratorio de ensayos biológicos del programa de Bioingeniería de la Universidad de Antioquia

Abstract

RESUMEN : Los fibroblastos son las células más abundantes del tejido conectivo, juegan un papel importante en la cicatrización de heridas mediante la formación de matriz extracelular. Gracias a su prominencia, muchas enfermedades, lesiones y patologías genéticas están vinculadas a este tipo de células, lo cual permite a investigadores realizar avances bioquímicos mediante el cultivo celular de fibroblastos. El aislamiento de células a partir de la extracción de tejidos primarios es un componente esencial para la investigación médica, ya que son una fuente confiable para comprender el proceso fisiológico, morfológico y molecular de las células humanas. El objetivo de este proyecto fue implementar y estandarizar un protocolo de extracción de fibroblastos de tejido gingival. Para ello se realizó una propuesta inicial del proceso de extracción celular utilizando biopsias de tejido gingival clínicamente sanas. La extracción de las células se realizó utilizando una combinación del método de digestión enzimática y el método de explante directo. Después de varios pasajes se obtuvo un cultivo celular confluente. Finalizado lo anterior se realizó la caracterización morfológica mediante tinción de H&E verificando la morfología característica de los fibroblastos y caracterización cuantitativa mediante el uso de un hemocitómetro. Mediante el ensayo de citotoxicidad MTT se evaluó la biocompatibilidad de un biomaterial proporcionado por el grupo de investigación BIOMAT con los fibroblastos gingivales (hGF) obtenidos. Se obtuvo una menor viabilidad celular comparable con la línea L929.

ABSTRACT : Fibroblasts are the most abundant cells of connective tissue and play an important role in wound healing through the formation of extracellular matrix. Due to their prominence, many diseases, injuries and genetic pathologies are linked to this cell type, allowing researchers to make biochemical advances through fibroblast cell culture. Isolation of cells from primary tissue extraction is an essential component for medical research, as they are a reliable source for understanding the physiological, morphological and molecular process of human cells. The objective of this project was to implement and standardize a protocol for the extraction of fibroblasts from gingival tissue. For this purpose, an initial proposal of the cell extraction process was made using clinically healthy gingival tissue biopsies. Cell extraction was performed using a combination of the enzymatic digestion method and the direct explant method. After several passages, a confluent cell culture was obtained. Morphological characterization was performed by H & E staining to verify the characteristic morphology of fibroblasts and quantitative characterization using a hemocytometer. Using the MTT cytotoxicity assay, the biocompatibility of a biomaterial provided by the ''BIOMAT'' research group with the obtained gingival fibroblasts (hGF) was evaluated. A lower cell viability comparable with the L929 line was obtained.