Estandarización de una PCR en tiempo real para los genes SID4, ZRC1 y HC100 de Histoplasma capsulatum

Abstract

RESUMEN: Histoplasma capsulatum es un hongo dimórfico que se caracteriza por ser geofílico-saprófito, y puede encontrarse en diversos ambientes gracias a su fácil adaptación, aunque generalmente se encuentra en espacios cerrados con una humedad relativamente alta o en lugares donde se puedan encontrar normalmente excretas de aves y guano de murciélagos. Este hongo es el agente causal de la enfermedad conocida como histoplasmosis, la cual se da por la inhalación de microconidias o fragmentos de micelio del hongo. A lo largo de los años se han podido describir diferentes mecanismos y factores de virulencia que le permiten al hongo generar enfermedad, pero a pesar de los avances obtenidos, aún hay mecanismos que no han sido totalmente descritos como es el caso de algunos genes relacionados con la captación de micronutrientes como SID4 y ZRC1, asociados con la obtención de hierro y zinc, respectivamente, y genes que parecen tener una importancia en la supervivencia y replicación del hongo como es el caso del gen HC100 que codifica para una proteína de 100 kDa. El objetivo de este estudio fue estandarizar un protocolo de PCR en tiempo real para determinar la presencia de estos tres genes en la cepa HC1980 de Histoplasma capsulatum. Resultados: Se diseñaron primers con un buen nivel de rendimiento y se realizó la estandarización de la PCR en tiempo real para los genes SID4, ZRC1 y HC100. No se evidenciaron dímeros de primers ni contaminación en la técnica; además, se pudo observar amplificación ya que la fluorescencia se detectóa las temperaturas y concentraciones evaluadas. Conclusiones: Se estandarizó exitosamente una PCR en tiempo real para la detección de los genes SID4, ZRC1 y HC100 de Histoplasma capsulatum, la cual servirá para futuros ensayos que permitan medir la expresión de los genes en ausencia de micronutrientes o en cultivo con macrófagos y, en un futuro, poder determinar la función exacta de cada uno de ellos.