Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://hdl.handle.net/10495/33193
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dc.contributor.advisorGallego Gómez, Juan Carlos-
dc.contributor.authorEscudero Flórez, Manuela-
dc.date.accessioned2023-01-20T18:13:21Z-
dc.date.available2023-01-20T18:13:21Z-
dc.date.issued2022-
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/10495/33193-
dc.description.abstractRESUMEN: La infección por el Virus Dengue (DENV) es la arbovirosis más prevalente en el mundo. La disfunción endotelial es un sello distintivo de la patogénesis durante el estadio más severo de la enfermedad conocido como dengue grave, presentando fuga vascular, shock hipovolémico y falla multiorgánica. Sin embargo, los mecanismos por los cuales se produce la disfunción endotelial aún no han sido bien dilucidados y el enfoque inmunopatogénico no ha proporcionado una terapia efectiva para la prevención de las muertes. Una perspectiva diferente para entender la enfermedad es la disrupción de la barrera endotelial mediante la liberación de factores solubles por parte de las células endoteliales infectadas, generando el aumento en la permeabilidad vascular. Para identificar los posibles mecanismos celulares implicados durante la infección por dengue, se expusieron células endoteliales de microvasculatura humana (HMEC-1) a medios condicionados colectados tras la infección por DENV-2 y se evalúo la participación de la quinasa c-ABL, proteína involucrada en la regulación del citoesqueleto y las uniones interendoteliales. Utilizando inhibición farmacológica de c-ABL con Imatinib y la estrategia de silenciamiento génico de la proteína por medio de la transfección con miRNAs artificiales, se encontró que participaba en la entrada y liberación viral, además, el silenciamiento de c-ABL indujo remodelación del citoesqueleto de actina en células HMEC-1. El tratamiento con factores solubles liberados tras la infección por DENV-2 en células endoteliales, provocó el aumento en los niveles de expresión de c-ABL y p-CRK II, blanco celular directo de la quinasa c-ABL, sugiriendo su activación. Este incremento fue significativo con los medios condicionados colectados 48 horas post-infección. Asimismo, se encontró un aumento en la expresión de marcadores mesenquimales como Vimentina y N-cadherina y, una disminución concomitante de proteínas específicas endoteliales VE-cadherina y ZO-1, bajo el tratamiento con los factores solubles derivados de la infección. Finalmente, se comprobó que las células endoteliales adquirieron un carácter migratorio al ser expuestas a los factores solubles producidos por DENV-2 en células endoteliales que fue revertido por el tratamiento con Imatinib y con el silenciamiento de c-ABL. Este estudio establece por primera vez a DENV-2 como un potencial inductor de EndMT, sugiriendo que los cambios fenotípicos de las células endoteliales son inducidos por los factores solubles secretados tras la infección produciendo pérdida de las uniones intercelulares y, por ende, desestabilización vascular durante los casos de dengue grave. Más aún, a pesar de que este estudio fue realizado bajo la modalidad In Vitro, c-ABL aparece como un prometedor blanco terapéutico basado en la estrategia antivirales basados en el hospedero.spa
dc.description.abstractABSTRACT: Dengue virus infection is the most prevalent arbovirosis in the world. Endothelial dysfunction is a hallmark of pathogenesis during the most severe stage of the disease, known as severe dengue, exhibiting vascular leakage, hypovolemic shock, and multisystemic failure. However, the mechanisms by which endothelial dysfunction occurs have not yet been well elucidated, and the immunopathogenic approach has not provided effective therapy for preventing deaths. A different perspective to understand the disease is the endothelial barrier disruption through the release of soluble factors by infected endothelial cells, which increases vascular permeability. In this context, we propose identifying possible cellular mechanisms involved in dengue infection. In this regard, human microvasculature endothelial cells (HMEC-1) were exposed to conditioned media collected after DENV-2 infection, and the participation of c-ABL kinase, a protein involved in the regulation of the cytoskeleton and interendothelial junctions, was evaluated. Using the pharmacological inhibition of c-ABL with Imatinib and gene silencing strategy of the protein by transfection with artificial miRNAs, it was found to be involved in viral entry and release. Furthermore, c-ABL silencing induced actin cytoskeleton remodeling in HMEC-1 cells. Treatment with soluble factors released after DENV-2 infection in endothelial cells resulted in increased expression levels of c-ABL and p-CRK II, a direct cellular target of c-ABL kinase, suggesting its activation. This increased expression was significant with conditioned media collected 48 hours post-infection. Likewise, we found an increase in the expression of mesenchymal markers such as Vimentin and N-cadherin and a concomitant decrease in endothelial-specific proteins VE-cadherin and ZO-1 under treatment with soluble factors derived from the infection. Finally, we observed that endothelial cells acquired a migratory character upon exposure to soluble factors produced by DENV-2 in endothelial cells that were reversed by treatment with Imatinib and c-ABL silencing. This study establishes for the first time DENV2 as a potential inducer of EndMT, suggesting that phenotypic changes in endothelial cells are induced by soluble factors secreted after infection and respond to the loss of intercellular junctions and thus vascular destabilization during severe dengue cases. Moreover, although this study was performed in vitro, c-ABL appears as a promising therapeutic target based on the host-based antiviral strategy.spa
dc.format.extent65spa
dc.format.mimetypeapplication/pdfspa
dc.language.isospaspa
dc.type.hasversioninfo:eu-repo/semantics/draftspa
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/embargoedAccessspa
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/co/*
dc.subject.meshVirus del dengue-
dc.subject.meshCélulas endoteliales-
dc.subject.meshInfecciones por arbovirus-
dc.subject.meshAntivirales-
dc.subject.meshImanitinib-
dc.subject.meshMicrovasos-
dc.subject.meshDengue virus-
dc.subject.meshEndothelial cells-
dc.subject.meshArbovirus infections-
dc.subject.meshAntiviral agents-
dc.subject.meshImatinib mesylate-
dc.subject.meshMicrovessels-
dc.titleFactores solubles producidos durante la infección por denv2 inducen cambios fenotípicos en células endotelialesspa
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesisspa
dc.publisher.groupGrupo Medicina Molecular y de Translaciónspa
oaire.versionhttp://purl.org/coar/version/c_b1a7d7d4d402bccespa
dc.rights.accessrightshttp://purl.org/coar/access_right/c_f1cfspa
thesis.degree.nameMagíster en Ciencias Básicas Biomédicasspa
thesis.degree.levelMaestríaspa
thesis.degree.disciplineCorporación Académica Ciencias Básicas Biomédicas. Maestría en Ciencias Básicas Biomédicasspa
thesis.degree.grantorUniversidad de Antioquiaspa
dc.rights.creativecommonshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/spa
dc.publisher.placeMedellín - Colombiaspa
dc.type.coarhttp://purl.org/coar/resource_type/c_bdccspa
dc.type.redcolhttps://purl.org/redcol/resource_type/TMspa
dc.type.localTesis/Trabajo de grado - Monografía - Maestríaspa
dc.subject.proposalQuinasa c-ABLspa
dc.subject.meshurihttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D003716-
dc.subject.meshurihttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D042783-
dc.subject.meshurihttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D001102-
dc.subject.meshurihttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D000998-
dc.subject.meshurihttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D000068877-
dc.subject.meshurihttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D055806-
Aparece en las colecciones: Maestrías de la Corporación Académica Ciencias Básicas Biomédicas

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