Exitoso cultivo in vitro de gametocitos de Plasmodium falciparum

Abstract

RESUMEN: Introducción. Los estadios sexuales de Plasmodium falciparum han sido menos estudiados que los estadios asexuales. Al parecer, esto se debe a la carencia de cultivos estandarizados in vitro y a la dificultad de reconocer sus estadios de desarrollo. Estos hechos no permiten el estudio de aspectos biológicos, aspectos metabólicos, expresión de genes y síntesis de proteínas durante los estadios sexuales, temas de interés en la investigación de nuevos medicamentos antipalúdicos, principalmente los aislados de plantas, y la identificación de un potencial blanco contra Plasmodium. Objetivos. Establecer un cultivo in vitro de gametocitos, con la identificación de sus cinco estadios de desarrollo, y asegurar su continua producción. Materiales y métodos. El cultivo in vitro de gametocitos se realizó a partir de la cepa NF54 de P. falciparum en medio RPMI, con determinación de la parasitemia asexual y sexual, adición de glóbulos rojos A-Rh+ sólo el primer día de cultivo y cambio diario del medio con adición de mezcla de gases (90% N2, 5% O2; 5% CO2), asegurándose que el cultivo se mantuviera a 37 °C. Cuando la parasitemia asexual estuvo entre 3% y 5%, se comenzó a agregar el doble de volumen de medio. Resultados. Se obtuvieron gametocitos en estadios I, II y III a partir del día 11 de cultivo y estadios IV y V a partir del día 14 de cultivo. Conclusiones. Se estandarizó un cultivo in vitro para estadios sexuales de P. falciparum que puede usarse para futuros estudios de evaluación de compuestos, naturales o sintéticos, que actúen sobre los gametocitos, lo cual podría permitir el desarrollo de nuevas estrategias de control contra el paludismo

ABSTRACT: Introduction. The sexual stages of Plasmodium falciparum have not been studied in as much detail as the asexual stages due to the lack of standardized in vitro cultures as well as difficulties in identifying the sexual development stages of the parasite. These difficulties hamper the studies on biology, metabolism, gene expression and protein synthesis during sexual stages. Each of these facets are important targets in antimalarial drug research, particularly the identification of potential therapeutic agents against Plasmodium (derived mainly from plants). Objectives. An in vitro culture of P. falciparum gametocytes was established to standardize the identification of its five developmental stages and ensure their continuous production. Materials and methods. The in vitro gametocyte culture was established from the P. falciparum NF54 strain in RPMI culture medium, with assessment of the asexual and sexual parasitaemia. The medium was supplemented with type A Rh+ red blood cells only on the first day of culture. Subsequently, the medium was changed daily, together with addition of gas mixture (90% N2, 5% O2, 5% CO2) and maintenance of the culture temperature at 37 °C. When asexual parasitaemia reached 3 to 5%, the medium was changed by doubling its volume. Conclusions. We standardized an in vitro culture for sexual stages of P. falciparum that can be used for future studies about evaluation of compounds of synthetic or natural origen agai