Diagnóstico molecular del Staphylococcus aureus en leche de vacas afectada por mastitis

Abstract

RESUMEN: Entre los agentes contagiosos que inducen mastitis severas en vacas, se encuentra el Staphylococcus aureus (S. aureus), de difícil curación clínica y alta resistencia a antimicrobianos. Debido a que el cultivo microbiológico de las muestras clínicas, solo es capaz de detectar alrededor del 50% de los casos positivos (Koskinen et al., 2009), el diagnóstico por reacción de la polimerasa en cadena (PCR) ofrece una posible alternativa. El objetivo de esta investigación fue contribuir a la estandarización de un diagnóstico rápido a partir de PCR para detectar S. aureus en leche de vacas afectadas por mastitis. Los resultados demostraron que con los siguientes fragmentos de nucleótidos empleados como cebadores: F 5' AGC TGT GGA TTG TCC TTT GG 3' y R 5' TCG CTC GCT CAC CTT AGA A 3', se obtenían secuencias amplificadas de 499 pb, que si bien no serían adecuadas para el diagnóstico de muestras clínicas por tener una especificidad del 63%, detectaron S. aureus en 12 de 13 muestras positivas por cultivo microbiológico, lo que indica una alta sensibilidad. En conclusión, se requiere buscar nuevos cebadores que amplifiquen regiones del S. aureus que no sean compartidas con otras bacterias, en especial aquellas que producen mastitis en vacas de leche.

ABSTRACT: Staphylococcus aureus (S. aureus) is one of the infectious agents that induce severe mastitis in cows with a difficult bacteriological cure and high antimicrobial resistance. Because the microbiological culture of clinical samples only shows results in 50% of the cases (Koskinen et al., 2009), diagnostic through PCR is an alternative. The aim of this study was to prove if the primers described by Cremonesi et al. (2006) for the S. aureus diagnosis, with good sensitivity and specificity, could be used in clinical samples too. The results showed that the following nucleotide sequences can be used as primers: F 5’ AGC TGT GGA TTG TCC TTT GG 3’ and R 5’ TCG CTC GCT CAC CTT AGA A 3’ in order to obtain a 499 pb enlargemenr are not useful in clinical samples due their low specificity (62.95%). It is required to search new primers to amplify S. aureus regions not shared with other bacteria, especially those cauding mastitis in dairy cows.