Evaluación del rendimiento diagnóstico de un nuevo método para la detección semicuantitativa del antígeno capsular de Cryptococcus en muestras de suero y líquido cefalorraquídeo

Abstract

RESUMEN:La criptococosis es una enfermedad que afecta principalmente individuos inmunocomprometidos, teniendo como principal complicación la meningitis, dada su alta mortalidad. Guías internacionales y nacionales recomiendan el diagnóstico de la criptococosis mediante la detección del antígeno capsular de Cryptococcus (CrAg), además de la titulación de la muestra, pero, la metodología convencional de titulación implica sobrecostos económicos. Objetivo. Evaluar el rendimiento diagnóstico de un nuevo método para la detección semicuantitativa del antígeno capsular de Cryptococcus (CrAgSQ Lateral Flow Assay, IMMY ™) en muestras de suero y líquido cefalorraquídeo de pacientes con sospecha de criptococosis. Metodología: Estudio transversal analítico. Se seleccionaron al azar y se analizaron 151 muestras, incluidos 66 LCR (50 CrAg LFA positivos) y 85 (49 CrAg LFA positivos). Estas muestras procedían de pacientes remitidos al laboratorio de micología médica y experimental de la Corporación para Investigaciones Biológicas, en Medellín, Colombia. Las muestras fueron recolectadas entre 2014 y 2022 y se almacenaron a -80°C y analizadas usando tres métodos; el ensayo de flujo lateral (CrAg, IMMY ™), actual método de referencia, la nueva técnica de flujo lateral semicuantitativa (CrAg SQ, IMMY ™), y un inmunoensayo enzimático (EIA) para detección de antígeno capsular de Cryptococcus (Clarus Cryptococcal Antigen EIA [EIA-CrAg], IMMY ™). Se realizaron análisis de concordancia entre métodos y analistas de laboratorio, también se realizó la comparación de títulos de antígenos, y se analizó la validez diagnóstica. Resultados. Utilizando CrAg LFA como referencia, el CrAgSQ LFA obtuvo una sensibilidad y especificidad del 100% en suero y LCR. El análisis de concordancia entre CrAg LFA y CrAgSQ LFA mostró una kappa de 1,00. Además, al comparar la titulación con los resultados de CrAgSQ LFA, se observó que en la categoría 1+ (n=16), los títulos oscilan entre 1:2 y 1:20, en 2+ (n=14), entre 1:5 y 1:40, en 3+ (n=62), entre 1:20 y 1:2560, y en la categoría 4+ (n=7), entre 1:320 y 1:2560. Así mismo, la concordancia inter-observador de la CrAg SQ LFA mostró valores kappa ponderados de 0,926 y 0,966, y una kappa global de 0,868. La sensibilidad del CrAg EIA utilizando el punto de corte del fabricante fue del 84% con especificidad de 100%. Conclusiones. El CrAgSQ LFA demostró una alta sensibilidad y concordancia en comparación con la prueba de referencia, CrAg LFA. Se observó una muy buena concordancia inter-observador y entre métodos. Finalmente, este es el primer estudio de rendimiento diagnóstico del método CrAgSQ LFA en Latinoamérica y nuestros hallazgos permiten concluir que es una excelente alternativa para apoyar el diagnóstico de criptococosis.

ABSTRACT: Cryptococcosis is a disease that affects immunocompromised individuals. with meningitis as the main complication, given its high mortality. International and national guidelines recommend the diagnosis of cryptococcosis by detection of Cryptococcus capsular antigen (CrAg), in addition to sample titration, but the conventional titration methodology involves over cost of testing. Objective. To evaluate the diagnostic performance of a new method for the semiquantitative detection of Cryptococcus capsular antigen (CrAgSQ Lateral Flow Assay, IMMY ™) in serum and cerebrospinal fluid samples from patients with suspected cryptococcosis. Methodology. Analytical cross-sectional study. 151 specimens included 66 CSF (50 CrAg-LFA positive) and 85 sera (49 CrAg-LFA positive) were random selected and tested. These samples came from patients referred to the laboratory of medical and experimental mycology of the Corporación para Investigaciones Biológicas, in Medellín, Colombia. Samples were collected between 2014 to 2022 and stored at -80°C. Samples were tested using three methods: the lateral flow assay (CrAg, IMMY ™), current reference method, the new semiquantitative lateral flow technique (CrAg SQ, IMMY ™), and an enzyme immunoassay (EIA) for detection of Cryptococcus capsular antigen (Clarus Cryptococcal Antigen EIA [EIA-CrAg], IMMY ™). Concordance analyses were performed between methods and laboratory analysts, antigen titer comparisons were also performed, and diagnostic validity was analyzed. Results. Using CrAg LFA as a reference, the CrAgSQ LFA has a sensitivity and specificity of 100%. The concordance analysis between CrAg LFA and CrAgSQ LFA showed a kappa of 1.00. Furthermore, when comparing titer with CrAgSQ LFA results, it was observed that in the 1+ category (n=16), titers ranged from 1:2 to 1:20, in 2+ (n=14), from 1:5 to 1:40, in 3+ (n=62), from 1:20 to 1:2560, and in the 4+ category (n=7), from 1:320 to 1:2560. Likewise, the inter-observer agreement of the CrAg SQ LFA showed weighted kappa values of 0.926 and 0.966, and an overall kappa of 0.868. The sensitivity of the CrAg EIA using the manufacturer's cut-off point was 84% with specificity of 100%. Conclusions. The CrAgSQ LFA demonstrated high sensitivity and concordance compared to the reference test, CrAg LFA. A very good interobserver and method agreement was observed. Finally, this is the first diagnostic performance study of the CrAgSQ LFA method in Latin America and our findings allow us to conclude that it is an excellent alternative to support the diagnosis of cryptococcosis.