Obtaining and characterization of spheroids using colon adenocarcinoma SW480 cells

Abstract

RESUMEN: El cáncer de colon ha sido estudiado convencionalmente mediante modelos in vitro en monocapa para entender su biología y para identificar agentes terapéuticos, pero no representan las células de un tumor que crece en tres dimensiones. Esta nota técnica presenta un protocolo para desarrollar y caracterizar un modelo tridimensional de esferoides de diferentes tamaños formados con células de adenocarcinoma de colon SW480 sembradas en micromoldes de agarosa que se dejaron crecer hasta por 21 días. Los esferoides se caracterizaron, mediante citometría de flujo, con base en el ciclo celular, función mitocondrial y apoptosis. Se encontró que esferoides de 400 μm de tamaño de siembra y tres días de crecimiento representan un modelo que posee características similares a las de los tumores in vivo. Se propone un método de fácil implementación para evaluar agentes terapéuticos, previo al uso de modelos animales.

ABSTRACT: Colon cancer has conventionally been studied using in vitro monolayer models to understand its biology and identify therapeutic agents; nevertheless, they do not represent tumor cells growing in three dimensions. This technical note presents a protocol to develop and characterize a three-dimensional model of spheroids of different sizes, formed with SW480 colon adenocarcinoma cells seeded on agarose micromolds allowed to grow for up to 21 days. The spheroids were characterized by flow cytometry based on cell cycle, mitochondrial function, and apoptosis. Spheroids of 400 μm seeding size and 3 days of growth were found to represent a model possessing similar characteristics to those of tumors in vivo. An easy-to-implement method to evaluate therapeutic agents is proposed, previous to the use of animal models.