Selección, cultivo y agrupamiento de embriones bovinos

Abstract

ABSTRACT: In vitro production of embryos (1VP) is a well established methodology, nevertheless the ratio of morulae (M) and blastocyst (B) obtained from fertilized oocytes remains low (<30%). The aim of this study was to evaluate the effect of grouping the embryos based on their development at 72 hours postinsemination (hpi) and their culture in fresh or old medium. The collection, maturation, fertilization and culture were performed as reported by Camargo (4). At 72 hpi, embryos were divided into four groups according to their development (2, 3-4,5-8,9-16 cells) and cultured for other 96 hours. Some cultures were performed in the same medium and others in a new one. The proportion of M and B was recorded. Our results show the beneficial effects of selection (p<0.05). Microdrops with unselected zygotes were used as control. Advanced stage embryos (5-8 and 9-16 cells) show better developmental rates. The medium being new or old had not effect on the development. We propose as a culture strategy to discard slow-cleaving embryos at 72 hpi to improve the efficiency of the IVP practice. Our results open an exciting field of research in the early development and kinetics of embryos. It could be possible that fast-cleaving embryos produce factor(s) that promote development and/or slow cleaving embryos produce toxic factors deleterious for the other embryos.

RESUMEN: La producción in vitro de embriones bovinos (PIV) es una metodología bien establecida. Sin embargo la proporción de mórulas (M) o blastocistos (8) obtenida de ovocitos fertilizados permanece baja (<30%). El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de agrupar los embriones basados en su desarrollo a las 72 horas post inseminación (hpi) y su cultivo en el medio inicial y en medio nuevo. El procedimiento de obtención, maduración, fertilización y cultivo se realizó de acuerdo con lo descrito por Camargo et al. (4). A las 72 hpí, los embriones fueron divididos en cuatro grupos de acuerdo con su desarrollo (2, 3-4, 5-8, 9-16 células) y cultivados por 96 horas adicionales. Algunos cultivos fueron hechos en el mismo medio y otros en medio nuevo. La proporción de 111 y B fue evaluada. Como control se utilizaron microgotas con cigotos no seleccionados según su desarrollo. Diferencias con p<0.05 fueron considerados estadísticamente significativos. Nuestros resultados muestran el efecto benéfico de la seleccción (p<0.05), los embriones en estado avanzado (5-8 y 9-16 células) mostraron las mejores tasas de desarrollo. El cambio de medio no tuvo ningún efecto en el desarrollo. Se propone como estrategia de cultivo descartar los embriones de clivaje lento a las 72 hpi para mejorar la eficiencia de la práctica de P1V. Nuestros resultados abren un campo excitante de investigación en el desarrollo temprano y la cinética de los embriones. Podría ser posible que los embriones de rápido desarrollo produzcan factores embriotrópicos que promuevan su desarrollo y/o que los embriones de clivaje lento produzcan factores tóxicos deletéreos para el embrión.