Respuesta de tres genotipos de tomate al cultivo in vitro y aislamiento de protoplastos

Abstract

ABSTRACT: The goal of this study was to evaluate the best plant material source for protoplast isolation, cell suspensions or leaf mesophyll cells in three tomato genotypes with different levels of resistance to Phytophthora infestans: Solanum habrochaites (503) resistant, S. lycopersicum (507) susceptible, and the hybrid partially resistant (508). after the in vitro establishment from certi ed seeds of the 503 and 507 genotypes, and cuttings of the 508 genotype, the leaves from the developed and multiplied plantlets were used for callus induction. four growth regulator combinations per genotype and two light conditions were evaluated, with the highest percentages of callus formation under dark conditions. the combinations of regulators with greatest effect on growth and callus friability were Bap (1 ppm) + iaa (4 ppm) for the 503 genotype and Bap (4 ppm) + iaa (1 ppm) for the 507 and 508 genotypes. these combinations of regulators were used for the establishment of cell suspensions and plotting of the cell growth curve. protoplast isolation from cell suspensions was conducted in the exponential phase, evaluating different enzymatic mixtures and incubation times; however, no response was obtained for any genotype. from mesophyll, 1.2 x 105 protoplasts/ml with high viability were obtained for the 503 genotype (0.6% cellulose and 0.1% pectinase, 8 h incubation); 1.9 x 105 protoplasts/ml for the 507 genotype (4% cellulose and 0.4% pectinase, 8 h incubation); and 1.1 x 105 protoplasts/ml for the 508 genotype (2% cellulose and 0.2% pectinase, 7 h incubation). Key words: callus, mesophyll,suspension cells, Solanum lycopersicum, Solanum habrochaites.

RESUMEN: El objetivo de esta investigación fue evaluar la mejor fuente de material vegetal para el aislamiento de protoplastos, suspensiones celulares o foliolos en tres genotipos de tomate con diferente grado de resistencia a Phytophthora infestans: Solanum habrochaites (503) resistente, S. lycopersicum (507) susceptible y el híbrido parcialmente resistente (508). Luego de lograr el establecimiento in vitro a partir de semilla certificada en los genotipos 503 y 507 y de estacas del genotipo 508, las hojas de las vitroplantas desarrolladas y multiplicadas se usaron para la inducción de callo. se evaluaron cuatro combinaciones de reguladores de crecimiento y dos condiciones lumínicas por genotipo, encontrándose los porcentajes más altos de formación de callo en oscuridad. las combinaciones de reguladores con mayor efecto sobre el crecimiento y friabilidad de los callos fueron Bap (1 ppm) + aia (4 ppm) para el genotipo 503 y Bap (4 ppm) + aia (1 ppm) para los genotipos 507 y 508. estas combinaciones de reguladores fueron utilizadas para el establecimiento de las suspensiones celulares y el trazado de la curva de crecimiento. el aislamiento de los protoplastos a partir de suspensiones celulares se realizó en la fase exponencial, evaluando diferentes mezclas enzimáticas y tiempos de incubación; sin embargo, no se logró respuesta para ningún genotipo. A partir del mesó lo, se obtuvo 1,2 x 105 protoplastos/ml con alta viabilidad para el genotipo 503 (celulasa 0,6% y pectinasa 0,1%, 8 h de incubación); 1,9 x 105 protoplastos/ml para el genotipo 507 (celulasa 4% y pectinasa 0,4%, 8 h de incubación); y para el genotipo 508, 1,1 x 105 protoplastos/ml (celulasa 2% y pectinasa 0,2%, 7 h de incubación). Palabras clave: callo, mesófilo, suspensión celular, Solanum lycopersicum, Solanum habrochaites.