Expresión de la proteína verde fluorescente y proteína Core del Virus de la hepatitis C en la línea de hepatoma HepG2 mediante el sistema de expresión del Semliki Forest Virus

Abstract

RESUMEN: Se utilizó un vector replicón del SFV (Semliki Forest Virus) que codifica la proteína verde fluorescente (GFP) paradeterminar la eficiencia de este sistema de expresión en la línea celular HepG2. La transcripción in vitro de los plásmidospSFV1-GFP y pSFV-helper se efectuó usando un estuche comercial. Se llevó a cabo la transducción de células HepG2 conlas partículas virales recombinantes (rSFV1-GFP). Un alto nivel de expresión de GFP se detectó por citometría de flujo encélulas HepG2, hasta 96 horas postransducción (h. p. t.), con un nivel máximo 48 h. p. t. Se observó un efecto citopáticomoderado en las células HepG2 hasta 72 h. p. t. La validación del sistema de expresión en la línea HepG2 con la proteínareportera GFP, justificó la continuación de los ensayos con la proteína Core del virus de la Hepatitis C (VHC). En célulasHepG2 transducidas con rSFV1-Core se demostró la expresión de la proteína viral entre 24 y 96 h. p. t., aunque en menornivel que la proteína reportera. Se observó un efecto citopático marcado 24 h. p. t. Estos resultados indican que el sistemade expresión basado en el SFV, puede ser una herramienta útil para la expresión transitoria de proteínas heterólogas, comola proteína Core, en líneas celulares hepáticas, estableciendo así un modelo de estudio de la patogénesis del VHC

ABSTRACT: A SFV replicon vector encoding the enhanced green fluorescent protein (GFP) was used to determine the kinetics ofexpression of the reporter gene GFP in the liver cell line HepG2.In vitro transcription of the pSFV1-GFP and pSFV-helperplasmids was performed using a commercial kit. Transduction of HepG2 cells with recombinant viral particles (rSFV1-GFP) was performed. Expression of GFP was detected by flow cytometry in rSFV-transduced HepG2 cells. The proteinwas expressed to high levels with maximum expression 48 hours postransduction (h. p. t.) and was detected up to 96 h. p.t. There was a low cytopathic effect in HepG2 cells at 72 h. p. t. Confirmation of expression of the reporter protein inHepG2 cells using the SFV expression system justified pursuing assays with the Hepatitis C virus (HCV) Core protein.Viral protein expression was demonstrated in rSFV1- Core-transduced HepG2 cells between 24 and 96 h. p. t., althoughto lower levels than the reporter protein. A marked cytopathic effect was observed 24 h. p. t. These results indicate that theSFV-based expression system can be a useful tool for transient heterologous protein expression such as the HCV Core inhepatic cell lines, therefore establishing a model for studying HCV pathogenesis.