Seroprevalencia y detección del genoma del Virus de la Hepatitis E en individuos que conviven con el VIH y que hacen parte del programa de atención integral a pacientes en una IPS de la ciudad de Medellín

Abstract

RESUMEN: Introducción: el Virus de la Hepatitis E (VHE) es un virus hepatotropo de transmisión entérica. En individuos inmunocompetentes usualmente esta infección tiene un curso agudo y autolimitado; sin embargo, en individuos que conviven con el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) la infección puede ser grave y de evolución crónica, caracterizada por la presencia de ARN viral por más de 6 meses y títulos bajos o moderados de anticuerpos IgG e IgM, especialmente en individuos con un recuento de células T CD4+ menor a 250 células/mm3. En Colombia, la infección por el VHE no es de notificación obligatoria, ni se hace un diagnóstico de rutina; y se ha demostrado la circulación del virus en individuos con diagnóstico de otras hepatitis virales, porcicultores, cerdos y aguas residuales, y presencia del genotipo 3 del VHE en individuos con hepatitis y en aguas residuales. Debido al desconocimiento de la infección por VHE en individuos VIH positivos y al riesgo elevado de infección crónica y otras complicaciones, es necesario realizar estudios que permitan determinar la circulación del virus e identificar factores de riesgo asociados; para implementar acciones encaminadas al control de la transmisión, tratamiento y prevención de complicaciones asociadas a la infección. Objetivo: determinar la seroprevalencia e infección por el VHE y describir los factores de riesgo asociados a la infección en individuos que conviven con el VIH. Metodología: de una cohorte de 1566 individuos que conviven con el VIH que consultaron al programa de atención integral a pacientes en una IPS de la ciudad de Medellín, se reclutaron 133 individuos mayores de 18 años entre octubre del 2019 y enero del 2020. Utilizando una encuesta estructurada se indagaron datos demográficos, socioeconómicos y factores de riesgo asociados a la infección por el VHE. Adicionalmente, se obtuvieron datos clínicos y paraclínicos de las historias médicas de los participantes. El comité de Bioética de la Sede de Investigación Universitaria de la Universidad de Antioquia aprobó el protocolo del estudio y el consentimiento informado empleado. De cada individuo se obtuvo una muestra de suero para la detección de anticuerpos IgG e IgM específicos contra VHE usando una prueba de ELISA comercial (DIAPRO). A partir del suero de los pacientes se obtuvo ARN, y a través de una RT-PCR in house multiplex se amplificó el ORF3 del genoma del virus y una secuencia de la RNAsa P como control interno de la prueba. Análisis estadísticos: para las variables categóricas se describieron frecuencias absolutas y relativas, y para las variables numéricas se utilizaron medidas de tendencia central y dispersión, a éstas se les evaluó la normalidad utilizando la prueba de Shapiro Wilk. En el análisis bivariado entre los factores de riesgo y la presencia de anticuerpos se utilizó la prueba exacta de Fisher y en el análisis de asociación se calcularon Odds ratio (OR) y el intervalo de confianza al 95% (IC95%). Para todas las pruebas un valor p<0.05 fue considerado estadísticamente significativo. Resultados: El 70,7% (94/133) de los individuos incluidos en el estudio eran hombres y el 56,4% (75/133) tenían entre 20-49 años. El 92,5% (123/133) de la población residía en zona urbana, el 91,7% (122/133) contaban con sistema de acueducto y el 89,5% (119/133) tenían red de saneamiento. Por último, en relación con la clasificación clínica de la infección por VIH que tenían los individuos al momento de ingresar al programa de atención integral, se encontró que el 54,9% (73/133) estaban en el estadio C1-C3, el 34,6% (46/133) en el estadio A1-A3 y el 10,5% (14/133) en los estadios B1-B3. Se detectaron anticuerpos IgG e IgM específicos contra el VHE en el 15% (20/133) y el 5,3% (7/133) de los individuos VIH positivos, respectivamente. El 75% (15/20) de los individuos con anticuerpos IgG anti-VHE eran hombres y 55% (11/20) tenían entre 20-49 años, en su mayoría residían en zona urbana [90% (18/20)], contaban con sistema de acueducto y tenían red de saneamiento [80% (16/20)]. La mitad de esta población tenía recuentos de células T CD4+ >500 células/mm3 [50% (10/20)], mientras que solo el 10% de los individuos tenían recuentos <200 células/mm3. El 90% (18/20) tenían una carga viral para VIH indetectable y el 95% (19/20) tenían pruebas de función hepáticas dentro del rango de referencia. De los individuos con anticuerpos IgM anti-VHE, la mayoría eran hombres [71%(5/7)] y el [57,1%(4/7)] tenía entre 20-49 años. Todos los individuos con anticuerpos IgM residían en zona urbana y contaban con red de saneamiento; tenían carga viral indetectable, el 48% (5/7) tenía recuentos de células T CD4+ >500 células/mm3 y ninguno de estos individuos presentó recuentos menores a 200 células/mm3. En los análisis de regresión logística encontramos que los individuos sin alcantarillado tenían mayor probabilidad de tener anticuerpos IgG contra el VHE [OR: 128 (IC 95%: 3,1-5358,6)]. De igual manera se encontró que los individuos con un estadio clínico C1-C3 tenían una menor probabilidad de tener anticuerpos IgG anti-VHE [OR: 0,032 (IC 95%: 0,001-0,862)]. El ARN del VHE, se detectó en el 2,3% (3/128) de los individuos incluidos en el estudio. Cinco individuos fueron excluidos de los análisis debido a que no se obtuvo amplificación del gen de la RNAsa P. De los individuos positivos para el ARN viral, dos fueron negativos para anticuerpos IgG e IgM anti-VHE y uno fue positivo para ambos anticuerpos. Adicionalmente, dos de los individuos eran hombres y una era mujer, con edades de 47, 54 y 60 años, respectivamente. Los tres individuos siempre han residido en el área urbana de Medellín y contaban con servicios de acueducto y red de saneamiento; además tuvieron recuentos de células T CD4+ >500 células/mm3, tenían pruebas de función hepáticas con valores dentro del rango de referencia, carga viral indetectable, vacuna contra la Hepatitis B y no tenían historial de infección por otras hepatitis virales. Conclusiones: se obtuvo una frecuencia de individuos que conviven con el VIH con anticuerpos IgG anti-VHE del 15%, resultados consistentes con lo reportado en América (4,1%-19%). En los análisis de asociación se encontró que los individuos en el estadio C1-C3 tienen una menor probabilidad de tener anticuerpos IgG anti-VHE. Adicionalmente, se encontró que los individuos que no contaban con red de saneamiento tenían una mayor probabilidad de tener anticuerpos IgG anti-VHE, factor de riesgo que ha sido descrito para la transmisión del virus.

ABSTRACT: Introduction: Hepatitis E Virus (HEV) is an enterically transmitted hepatotropic. In immunocompetent individuals, this infection usually has an acute and self-limited course; however, in individuals living with Human Immunodeficiency Virus (HIV), the infection can be severe and of chronic evolution, characterized by the presence of viral RNA for more than 6 months and low or moderate titers of IgG and IgM antibodies, especially in those with a TCD4+ cell count of less than 250/mm3. In Colombia, HEV infection is not notifiable; However, there is evidence that demonstrates the circulation of the virus in individuals diagnosed with other viral hepatitis, pig farmers, pigs, and wastewater, and the presence of HEV genotype 3 in individuals with hepatitis and in wastewater. Due to the lack of knowledge of HEV infection in HIV-positive individuals and the high risk of chronic infection and other complications, it is necessary to carry out studies to determine the circulation of the virus and identify associated risk factors to implement actions aiming at controlling transmission, treatment and prevention of complications associated with infection. Objective: To determine the seroprevalence and infection by HEV and to describe the risk factors associated with HEV infection in individuals living with HIV. Methodology: from a cohort of 1,566 individuals living with HIV who consulted the comprehensive patient care program at an IPS in the city of Medellin, 133 individuals over 18 years of age were recruited between October 2019 and January 2020. Using a structured survey, demographic, socioeconomic data and risk factors associated with HEV infection were investigated. Additionally, clinical and paraclinical data were obtained from medical records of the participants. The Bioethics Committee of the University Research Headquarters of the University of Antioquia approved the study protocol and the informed consent used. A serum sample was obtained from each individual for the detection of HEV-specific IgG and IgM antibodies using a commercial ELISA test (DIAPRO). RNA was obtained from the serum of the patients, and through an in-house multiplex RT-PCR, the ORF3 of the virus genome and an RNAse P sequence were amplified as internal control of the test. Statistical analysis: Absolute and relative frequencies were described for categorical variables, and measures of central tendency and dispersion were used for numerical variables, and normality was assessed using the Shapiro Wilk test. In the bivariate analysis between the risk factors and the presence of antibodies, Fisher's exact test was used, and in the association analysis, the odds ratio (OR) and the 95% confidence interval (95% CI) were calculated. For all tests a p value <0.05 value was considered statistically significant. Results: 70.7% (94/133) of the individuals included in the study were men and 56.4% (75/133) were between 20-49 years old. 92.5% (123/133) of the population lived in urban areas, 91.7% (122/133) had an aqueduct system and 89.5% (119/133) had a sanitation network. Finally, in relation to the clinical classification of HIV infection that individuals had at the time of entering the comprehensive care program, it was found that 54.9% (73/133) were in stage C1-C3, the 34.6% (46/133) in stage A1-A3 and 10.5% (14/133) in stages B1-B3. Additionally, specific IgG and IgM antibodies against HEV were detected in 15% (20/133) and 5.3% (7/133) of HIV-positive individuals, respectively. 75% (15/20) of the individuals with anti-HEV IgG antibodies were men and 55% (11/20) were between 20-49 years old, mostly residing in urban areas [90% (18/20)], had an aqueduct system and had a sanitation network [80% (16/20)]. Half of this population had CD4+ T cell counts >500 cells/mm3 [50% (10/10)], whereas only 10% of individuals had counts <200 cells/mm3. 90% (18/20) had undetectable HIV viral load and 95% (19/20) had liver function tests within the reference range. Of the individuals with IgM anti-HEV antibodies, the majority were men 71% (5/7) and 57.1% (4/7) were between 20-49 years old. All individuals with IgM antibodies lived in urban areas and had a sanitation network; had undetectable viral load, 48% (5/7) had TCD4+ cell counts >500 cells/mm3, and none of these individuals had counts less than 200 cells/mm3. In logistic regression analyses, we found that individuals without sewerage were more likely to have IgG antibodies against HEV [OR: 128 (95% CI: 3.1-5358.6)]. Similarly, it was found that individuals with a clinical stage C1-C3 had a lower probability of having anti-HEV IgG antibodies [OR: 0.032 (95% CI: 0.001-0.862)]. HEV RNA was detected in 2.3% (3/128) of the individuals included in the study. Five individuals were excluded from the analyzes because no amplification of the RNase P gene was obtained. Of the individuals positive for viral RNA, two were negative for IgG and IgM anti-HEV antibodies and one was positive for both antibodies. Additionally, two of the individuals were men and one was a woman, with ages of 47, 54 and 60 years, respectively. The three individuals have always lived in the urban area of Medellin and had access to aqueduct and sanitation services; they also had CD4+ T-cell counts >500 cells/mm3, liver function tests within the reference range, undetectable viral load, Hepatitis B vaccination, and no history of infection with other viral hepatitis. Conclusions: 15% of individuals living with HIV had anti-HEV IgG antibodies which is consistent with results reported in America (4.1%-19%). In the association analyzes it was found that individuals in stage C1-C3 they are less likely to have anti-HEV IgG antibodies. Additionally, it was found that individuals who did not have a sanitation network were more likely to have IgG anti-HEV antibodies, a risk factor that has been described for virus transmission.