Transitorios de Ca2+ de fibras de Flexor digitorum brevis y Soleus de ratón disociados enzimáticamente: ¿las diferencias cinéticas podrían asociarse con diferentes tipos de fibras?

Abstract

RESUMEN: Se utilizaron fibras de flexor digitorium brevis (FDB) y Soleus disociadas enzimáticamente para comparar los transitorios de Ca2+ de las fibras tipo I, IIA y IIX/D cargadas con el colorante fluorescente MagFluo4-AM, de gran rapidez de respuesta. En el FDB se encontraron dos morfologías diferentes de transitorios, denominadas tipo I (MT-I) y tipo II (MT-II). Los parámetros cinéticos de los transitorios simples MT-I (13 fibras, 21%) y MT-II (50 fibras, 79%) fueron: amplitud (<<F/F): 0,41+-0,05 vs 0,71+-0,03; tiempo de ascenso (ms): 1,41+-0,13 vs 1,0+-0,02; ancho medio (ms): 10+-0,82 vs 3,88+-0,11; tiempo de caída (ms): 43,8+-2,32 vs 21,2+-0,85; y constantes de caída (t1 y t1, ms): 2,58+-0,18 y 31,42+-2,48 vs 1,5+-0,05 y 13,24+-0,6, respectivamente; todas las diferencias fueron estadísticamente significativas. En el Soleus todos los transitorios fueron MT-I (n=21) y sus parámetros cinéticos fueron similares a los clasificados MT-I de FDB, excepto el ancho medio y el tiempo de caída. Losttétanos MT-I mostraron una forma de escalera y su caída ajustó con una exponencial, mientras que los MT-II no mostraron esta forma y su caída ajustó con una doble exponencial. Experimentos preliminares sugieren una relación directa entre la morfología de los transitorios y los tipos de miosina determinados con anticuerpos monoclonales y electroforesis. Estos resultados sugieren que las señales MT-I provienen de fibras tipo I y IIA mientras las MT-II corresponden a fibras tipo IIX/D y pueden proporcionar un criterio de identificación de los tipos de fibras vivas en músculos esqueléticos. (FONACIT G-2001000637 y G-2005000372).

ABSTRACT: Enzymatically dissociated flexor digitorium brevis (FDB) and Soleus fibers from mouse were used to compare the kinetics of electrically elicited Ca2+ transients of fiber types I, IIA and IIX/D, using the fast Ca2+ dye MagFluo4-AM. For FDB two Ca2+ transient morphologies, types I (MT-I, 13 fibers, 21%) and II (MT-II, 50 fibers, 79%) were found. The kinetic parameters being: amplitude (<<F/F): 0,41+-0,05 vs 0,71+-0,03; rise time (ms): 1,41+-0,13 vs 1,0+-0,02; half width (ms): 10+-0,82 vs 3,88+-0,11; decay time (ms): 43,8+-2,32 vs 21,2+-0,85; y time constants of decay (t1 and t1, ms): 2,58+-0,18 and 31,42+-2,48 vs 1,5+-0,05 and 13,24+-0,6, respectively; all comparisons being stadistically different. For Soleus (n=21) only MT-I was found, with similar characteristics to MT-I from FDB, except for the half width and decay time. Tetanic transients MT-I showed a staircase shape and the decay was fitted with one exponential, while MT-II did not show this shape and the decay was fitted with two exponentials. Preliminary experiments show a direct relationship between transient morphology and myosin type present in the fibers as determined using monoclonal antibodies and electrophoretic procedures. The results suggest that signals classified as MT-I may correspond to fibers types I and IIA while those classified as MT-II may correspond to fibers IIX/D. (FONACIT G-2001000637 y G-2005000372).