Efecto de la suplementación con alanina y glicina sobre los clivajes iniciales de embriones bovinos producidos in-vitro

Abstract

RESUMEN: Objetivo. Determinar el efecto de la suplementación con alanina y glicina en el medio de cultivo sobre el porcentaje de clivaje de embriones bovinos, bajo condiciones de alta (20%) y baja (7%) tensión de oxígeno. Materiales y métodos. Los embriones fueron producidos a partir de oocitos madurados in vitro en M-199 suplementado con hormonas e inseminados con semen criopreservado; los cigotos fueron cultivados en medio CR1- AA. Al momento del cultivo se adicionaron alanina y glicina (5 mM y 10mM final respectivamente). Se usaron 4 tratamientos (T1: aminoácidos y baja tensión de oxígeno; T2: aminoácidos y alta tensión de oxígeno; T3: no aminoácidos y baja tensión de oxígeno; T4: no aminoácidos y alta tensión de oxígeno). El clivaje fue evaluado a las 48 hpi (horas post inseminación) evaluándose el número de embriones clivados sobre el total de embriones cultivados y el estadío de desarrollo (no clivados, 2, 4, 5-8 células). Se usó el programa estadístico STATISTICA (versión 5.0). Resultados. El porcentaje de embriones de 5-8 células en el tratamiento 1 respecto a los otros 3 tratamientos fue mayor (p= 0.007). Conclusiones. Los aminoácidos alanina y glicina son fundamentales para los clivajes iniciales y en bajas tensiones de oxígeno se aumenta la proporción de embriones competentes hasta las 48hpi.

ABSTRACT: Objective. To determine the effect of supplementation with alanine and glicyne in vitro culture systems on the cleavage rate of bovine embryos under conditions of high (20%) and lower (7%) oxygen tension. Materials and methods. The embryos were produced from oocytes matured in vitro in M-199 supplemented with hormones and inseminated with cryopreservated semen; the zygotes were cultivated in CR1-AA medium. At culture moment alanine and glicyne were added (5 mm and 10mM final respectively). Four (4) treatments were used (T1: amino acids and low oxygen tension; T2: amino acids and high oxygen tension; T3: non amino acids and low oxygen tension; T4: non amino acids and high oxygen tension). The cleavage was evaluated to 48 hpi (hours post insemination) being evaluated the number of embryos cleavaged on the total of culture embryos and the development stage (non cleavaged, 2, 4, 5-8 cells). The statistical program STATISTICA version 5.0 was used. Results. Embryos rate of 5-8 cells in the treatment one regarding the other 3 ones were higher (p = 0.007). Conclusions. The amino acids alanine, glicyne and in low oxygen tensions are fundamental for the initial cleavages because the proportion of competent embryos increases up to 48 hpi.