Amplificación isotérmica de ácidos nucleicos tipo LAMP para la detección de Plasmodium: nueva técnica diagnóstica

Abstract

RESUMEN: Recientemente se introdujo en el diagnóstico de malaria una técnica llamada amplificación isotérmica de ácidos nucleicos, que usa el material genético plasmodial. Este escrito revisa la información disponible sobre amplificación isotérmica de ácidos nucleicos, especialmente en el campo del paludismo. Metodología: se revisaron las bases electrónicas Lilacs, Scielo, PubMed (Medline) y Ovid. Resultados: solo se encontraron tres referencias sobre amplificación isotérmica de ácidos nucleicos y malaria pero hubo abundante información sobre amplificación isotérmica de ácidos nucleicos en otras infecciones y campos de la medicina, en especial la infectología. La reacción de amplificación isotérmica de ácidos nucleicos requiere de una ADN polimerasa con actividad de desplazamiento de cadena y cuatro cebadores especialmente diseñados para reconocer seis secuencias distintas. Esto garantiza alta especificidad para la amplificación. Varias alternativas de amplificación isotérmica de ácidos nucleicos se han desarrollado para la identificación de virus, bacterias, micoplasmas, protozoos, hongos y levaduras. Ventajas de amplificación isotérmica de ácidos nucleicos son capacidad de amplificar ácidos nucleicos bajo condiciones isotérmicas (60-65 ºC); posibilidad de lectura y semicuantificación a simple vista y de cuantificación con un turbidímetro; altas sensibilidad y especificidad y, en general, capacidad diagnóstica; rapidez, bajo costo y facilidad de aplicación; tolera los componentes de los medios de cultivo y las sustancias biológicas. Entre las desventajas están que la baja concentración de ADN molde disminuye la eficacia del reconocimiento de los cebadores; la observación de la turbidez fue menos sensible que la visualización de los productos en gel de agarosa teñidos con bromuro de etidio y es crítica la prevención de la contaminación.

ABSTRACT: Introduction: isothermal nucleic acid amplifi cation (LAMP) was recently reported in the diagnosis of malaria. This uses plasmodial DNA to confi rm the diagnosis. This paper reviews the most relevant available information on LAMP, especially in the fi eld of malaria. Methodology: the electronic databases Lilacs, Scielo, PubMed (Medline) and Ovid, were reviewed. Results: only three references were found on LAMP and malaria but there was abundant information on LAMP and other infections in fi elds of medicine, mainly in infectious diseases. The LAMP reaction requires a strand displacement DNA polymerase and a system of four primers specifi cally designed to recognize a total of six different sequences in the DNA target. This guarantees high specifi city. Several alternatives of LAMP have been developed to identify viruses, bacteria, mycoplasma, protozoa, fungi and yeast. Advantages of LAMP: ability to amplify nucleic acids under isothermal conditions (60 and 65 ºC9; possibility of semi-quantitative reading by observation and quantitative interpretation using a turbidimeter ; high sensitivity and specifi city and, in general, diagnostic capacity, speed, low cost and ease of implementation; better performance than PCR when culture media and biological substances are processed. Disadvantages: the low concentration of DNA template reduces the primers effi cacy recognition; turbidimetry was less sensitive than the agarose gel and ethidium bromide analysis, prevention of contamination is critical.