Doença granulomatosa cronica da infancia: novos polimorfismos no gene NCF2

Abstract

RESUMO: Objetivos: Mutações no gene NCF2 resultam na forma autossômica recessiva da do ençagranulomatosa crônica da infância. Além de mutações conhecidas, descreveu seem pacientes com doença granulomatosa crônica da infância duas novas substituições no gene NCF2. O objetivo deste estudo foi investigar se estas substituições constituem polimorfismos do gene NCF2. Métodos: Investigamos a freqüência de duas substituições na seqüência do gene NCF2 em214 doadores sadios. A primeira é uma transição de C→T na posição –23 daregião 5 ́ reguladora. A segunda é uma transição de A→G na posição –21 daregião 3 ́ terminal do íntron 10. Extraímos DNA genômico de células do sangueperiférico. O DNA foi amplificado por meio de PCR com primers específicos parao gene NCF2, analisado quanto à presença de polimorfismos conformacionais decadeias simples, digerido com endonucleases específicas e sequenciado. O cálculodas freqüências genotípicas e alélicas seguiu a lei de Hardy e Weinberg. Resultados: Cem indivíduos foram avaliados quanto à presença da transição C→T na posição–23 da região 5 ́ reguladora; sendo 67% homozigotos para o alelo C, 32% heterozigotos, e apenas 1% homozigoto para T. Cento e quatorze indivíduos foram analisados quanto à presença da transição A→G na posição –21 da região 3 ́ terminal do íntron 10; dos quais 36% foram homozigotos para A, 43% heterozigotos e 21% homozigotos para G. Conclusão: Considerando as freqüências alélicas, concluímos que essas variantes correspondem a polimorfismos do gene NCF2. Suas possíveis implicações naexpressão do gene NCF2 constituem objeto de pesquisa atual em nosso laboratório. Termos de Indexação: imunodeficiências primárias, distúrbios fagocitários, criança, infecções de repetição.

ABSTRACT: Objectives: Mutations in the NCF2 gene result in an autosomical recessive form of chronic granulomatous disease of childhood. We have recently described nucleotide changes in p67-phox–deficient chronic granulomatous disease of childhood inpatients that apparently were not responsible for their chronic granulomatous disease of childhood phenotype. To determine if two of these changes are genetic polymorphisms, we analyzed their occurrence in the general population. Methods: We investigated the frequency of two substitutions in NCF2 gene in 214 healthy individuals. The first corresponded to a C→T transition at position -23 of the 5’ regulatory region of the gene. The second corresponded to an A→G transition inposition -21 of the 3’ end of íntron 10 (IVS10-21A→G). NCF2 gene fragmentsfrom genomic DNA were amplified by PCR with specific primers. These substitutions were detected in genomic DNA by conformational polymorphismanalysis of PCR-generated fragments, restriction endonuclease digestion assays, and DNA sequencing. Genotypes and allelic frequencies were calculated by the Hardy-Weinberg law equation. Results: A total of 100 healthy subjects were analyzed for the presence of the C→Ttransition of the 5’ regulatory region of the gene, 67% were homozygous for C, 32% were heterozygous, and 1% was homozygous for T. The A→G transition iníntron 10 was analyzed in 114 subjects, 36% were homozygous for A, 43% were heterozygous, and 21% were homozygous for G. Conclusion: Considering the allelic frequencies, we conclude that both substitutions correspond to polymorphisms of NCF2 gene. The possible implications for transcription or expression of NCF2 gene are under current investigation in our laboratory.