Estandarización del aislamiento y caracterización de células estromales de decidua y útero murinos

Abstract

RESUMEN: Las células estromales son las células más abundantes presentes en la decidua y juegan un papel muy importante durante la implantación, la nutrición fetal y el mantenimiento del embarazo. Los procedimientos que se han descrito para el aislamiento de células estromales requieren el uso de muchos anticuerpos monoclonales ya que hay contaminación con otros tipos celulares en la decidua y además algunos marcadores característicos de células estromales, muestran variabilidad en los diferentes días de la gestación. En este estudio se estandarizó un procedimiento de aislamiento por digestión enzimática, gradiente de densidad y adherencia al plástico y se caracterizaron las células estromales murinas por exclusión de marcadores que se expresan en macrófagos (F4-80), células epiteliales y trofoblasto (citoqueratina-7), obteniéndose un 98% de células negativas para estos marcadores que correspondería a las células estromales. Esta técnica de aislamiento permite obtener células estromales con métodos menos costosos y altamente eficientes que facilita el acceso a un modelo celular de gran utilidad en el estudio de la fisiología de la gestación en diferentes especies.

ABSTRACT: Stromal cells are the most abundant cell population present in decidual tissue; they are involved in key processes during embryo implantation, fetal nutrition and the pregnancy maintenance. Described procedures for stromal cells isolation require the use of many monoclonal antibodies due to contamination with another cell types in the decidua; besides, some markers of stromal cells show variability during the days of gestation. In this study, we standardized a procedure for isolation by enzymatic digestion, density gradient and adherence to plastic. Murine stromal cells were characterized by exclusion of markers that are expressed in macrophages (F4-80), epithelial cells and trophoblast (cytokeratin-7), yielding a 98% of negative cells for these markers that correspond to stromal cells. This isolation procedure permits to obtain stromal cells with less expensive and high efficiency methods that provide a useful cellular model to study the physiology of gestation in different species.

RESUMO: As células estromales são as células mais abundantes presentes na decídua e tem um papel muito importante durante a implementação, a nutrição fetal e a manutenção da gravidez. Os procedimentos descritos para o isolamento das células estromales necessitam o uso de muitos anticorpos monoclonais já que há contaminação com outros tipos celulares na decídua e demais alguns marcadores característicos das células estromales que tem variabilidade nos diferentes dias de gestação. No presente trabalho foi estandardizado um procedimento de isolamento por digestão enzimática, gradiente de densidade e aderência ao plástico e foram caracterizados as células estromales murinas por exclusão de marcadores que expressão em macrófagos (F4-80), células epiteliais e trofoblasto (citoqueratina-7), obtendo-se um 98% de células negativas para estes marcadores que corresponderia às células estromales. Esta técnica de isolamento permite obter células estromales com métodos menos custosos e altamente eficientes que facilita o aceso a um modelo celular de grande utilidade no estudo da fisiologia da gestação em diferentes espécies.