Amplificación y obtención de secuencias de rRNA mitocondrial en Lutzomyia spp. (Diptera: Psychodidae) vectores de leishmaniosis

Abstract

RESUMEN: Recientes investigaciones han señalado el ADN mitocondrial como herramienta importante en estudios de entomología molecular que incluyen no sólo la identificación de especies sino también el establecimiento de relaciones filogenéticas y evolutivas en insectos. En el presente estudio se amplificó y secuenció exitosamente un fragmento de 380 pb de la subunidad larga ribosomal mitocondrial en Lutzomyia longipalpis y Lutzomyia gomezi vectores de leishmaniosis, como paso preliminar hacia el conocimiento y obtención de secuencias con uso potencial en estudios taxonómicos y filogenéticos en estos insectos. Los oligonucleótidos usados para la amplificación por técnicas de reacción de polimerasa en cadena PCR, fueron diseñados con base en las regiones conservadas de insectos cuyas secuencias para esta región de ADN mitocondrial han sido previamente publicadas. Las secuencias obtenidas fueron ricas en adenina y timina (81%) una característica común en ADN mitocondrial de insectos y los alineamientos múltiples no presentaron ambigüedades características de ADN nuclear. Comparaciones preliminares entre las secuencias obtenidas sugieren la utilidad de esta región como carácter taxonómico para Lutzomyia nivel de especie.

ABSTRACT: Recent investigations have been suggested mitochondrial DNA as important tool in molecular entomology studies that include not only species identification, but also establishment of phylogenetic and evolutive relationships among insects. In this work we amplified and sequenced a fragment of 380 pb from the mitochondrial ribosomal large subunit: this preliminary work was done in order to obtain sequences with potential use as taxonomic character in sand flies. Primers used for PCR amplification and DNA sequencing were designed based on the consensus sequence of insects previously reported for this region. A bias toward adenine and thymine (81%) is consistent with the base composition of mtDNA sequences of other insects. Multiple alignment among sequences did not show ambiguities characteristic of nuclear DNA and preliminary comparisons suggest their utility as taxonomic character at the species level.