Producción y purificación de la proteína Core del virus de la hepatitis C en el sistema de expresión del baculovirus para ensayos biológicos

Abstract

RESUMEN: Introducción. La infección por el virus de la hepatitis C (VHC) se caracteriza por la alta frecuencia de infección persistente. La capacidad del VHC para inducir alteraciones en la función de las células del sistema inmune, específicamente en las células dendríticas, parece ser una de las estrategias virales implicada en el establecimiento de la infección persistente. Esta estrategia parece estar mediada en gran parte por una de las proteínas estructurales codificada por el genoma del VHC, la proteína Core, unidad estructural de la cápside viral. Objetivo. Una de las limitantes para la evaluación de las propiedades de Core es la obtención y la purificación de la proteína nativa (191 aa). El objetivo de este estudio fue la producción y la purificación de la proteína Core completa en un sistema eucariote para evaluar las propiedades de la proteína en cultivos de células dendríticas humanas. Resultados. En este estudio se logró la producción de la proteína Core completa en el sistema de expresión de baculovirus y su purificación por la técnica de separación por punto isoeléctrico y electroelución. La pureza de la proteína obtenida se confirmó por Western blot y tinción con plata. Estos análisis mostraron dos bandas únicas correspondientes a las isoformas p23 y p21 de la proteína Core, previamente descritas en la literatura. Conclusiones. La proteína obtenida posee varias de las condiciones de la proteína Core nativa, como peso molecular, isoformas y localización subcelular. Los procedimientos descritos en este artículo son aplicables a proteínas asociadas a membranas producidas en sistemas de expresión eucarióticos.

ABSTRACT: Background. The hepatitis C virus (HCV) commonly causes persistent infection. One of the viral mechanisms in preventing viral clearance is the ability of CV to induce functional alterations of the immune system cells, specifically of dendritic cells. Viral proteins producing the dendritic cell functional alterations have been identified as the HCV core protein, which makes up the capsid structural unit.Objective. One of the limitations to evaluate core protein properties is the difficulty in obtaining and purifying the complete protein -consisting of 191 amino acids. The aim of the current study was to produce and purify the recombinant core protein in a eukaryotic system, and to evaluate its effect in human dendritic cell cultures.Results. The core protein p23 isoform was expressed in a baculovirus system and purified using isoelectric point separation and electroelution. The purity of the core protein was confirmed by silver stain and Western blot. These analyses showed the presence of two bands that correspond to p23 and p21 isoforms of core protein as previously reported.Conclusion. The expressed protein differed from naive core protein is terms of molecular weight, isoforms and subcellular localization) The procedures developed for core protein are applicable for expression of other membrane-associated proteins produced in eukaryotic systems.