Análisis de concordancia de dos métodos de laboratorio para la detección de antígeno galactomanano de Aspergillus spp en muestras de suero y lavado broncoalveolar.

Abstract

RESUMEN: Introducción: La aspergilosis invasiva (AI) es la forma clínica más grave de las aspergilosis, infección potencialmente mortal especialmente en pacientes neutropénicos con una tasa cercana a 50%. Se estima que ocurren alrededor de 300.000 casos/año de AI en el mundo, relevante por alto costo en tratamiento, larga estancia hospitalaria y complicaciones. Una única prueba de laboratorio no es suficiente para llegar al diagnóstico de AI, ya que la definición de caso requiere de evidencias clínicas, radiológicas y microbiológicas, incluida en esta última la detección de antígeno galactomanano (GM), biomarcador que indica que el hongo es metabólicamente activo y su concentración se asocia con la carga fúngica. Entre las metodologías más empleadas para su detección se encuentra el inmunoensayo de absorción ligado a enzimas (GM-ELISA, Platelia BIO-RAD) recomendada en múltiples guías como técnica diagnóstica complementaria para la definición de casos de AI. La realización de esta prueba requiere de personal capacitado y de equipos de laboratorio especializados, este no es un ensayo mono-prueba, lo que afecta su acceso y oportunidad. En la actualidad se dispone de una prueba basada en ensayo de flujo lateral para la detección del antígeno (GM-LFA, IMMY) que ha presentado un desempeño analítico similar al GM-ELISA en estudios preliminares. Esta metodología puede suponer una alternativa diagnóstica que permitiría solucionar las limitaciones anteriormente mencionadas, facilitando a los médicos tratantes tomar decisiones más rápidas. Objetivo: Evaluar la concordancia entre los métodos de GM-ELISA y GM-LFA para la detección de galactomanano de Aspergillus spp en muestras de suero y lavado broncoalveolar (LBA). Metodología: Estudio de comparación de métodos diagnósticos. Se emplearon muestras de suero y LBA de pacientes con sospecha de aspergilosis remitidas a la Unidad de Micología Médica y Experimental (CIB) en Medellín, Colombia, entre 2021 y 2023. Las muestras fueron procesadas siguiendo las instrucciones de los fabricantes, ambas metodologías se realizaron de forma simultánea sin previo conocimiento de los resultados obtenidos y analizadas con puntos de corte ≥ 0,5 y ≥ 1,0. Se realizó un análisis estadístico evaluando pruebas de distribución, de frecuencia y medidas de resumen. Adicionalmente, se analizó la concordancia entre los métodos mediante en análisis de kappa y coeficiente de correlación intraclase. Resultados: Un total de 241 muestras, 125 fueron sueros (52%) y 116 LBA (48%). Del total de muestras analizadas (n=241), 36/241 (15%) fueron positivas por GM-ELISA, y 14/241 (6%) positivas por GM-LFA. Se obtuvieron valores kappa categorizados como moderado 0,476 con punto de corte de 0,5 y 0,569 con punto de corte de 1,0 para muestras de suero y LBA con un CCI de 0,675. Se realizaron análisis estratificados por tipo de muestra. Para las muestras de suero con punto de corte de 0,5 se obtuvo un valor kappa de 0,676 y con punto de corte de 1,0 un valor kappa de 0,757 categorizados como considerable y bueno, respectivamente, con un CCI de 0,801. Para LBA con punto de corte de 0,5 se obtuvo un valor kappa de 0,339 y de 0,392 con punto de corte de 1,0 categorizados como acuerdos bajos, con un CCI de 0,316. Conclusión: La concordancia entre pruebas en muestras de suero fue similar a lo anteriormente reportado en otros estudios teniendo concordancias entre aceptables y buenas para la detección de GM, mientras que el comportamiento con las muestras de LBA fue contrario a lo esperado, se esperaba un mayor acuerdo entre pruebas. En relación con el punto de corte se esperaba encontrar diferencias entre puntos de corte, se observó una ligera mejoría con punto de corte ≥1,0 ODI para las diferentes muestras evaluadas, sin diferencias estadísticamente significativas

ABSTRACT: Introduction: Invasive aspergillosis (IA) is the most severe clinical form of aspergillosis, potentially fatal infection especially in neutropenic patients with a rate close to 50%. It is estimated that around 300,000 cases/year of IA occur in the world, relevant for high cost in treatment, long hospital stay and complications. A single laboratory test is not sufficient to diagnose IA, since case definition requires clinical, radiological and microbiological evidence, including the detection of galactomannan antigen (GM), a biomarker that indicates that the fungus is metabolically active, and its concentration is associated with fungal load. Among the most used methodologies for its detection is the enzyme-linked absorbance immunoassay (GM-ELISA, Platelia BIO-RAD) recommended in multiple guidelines as a complementary diagnostic technique for the definition of IA cases. The performance of this test requires trained personnel and specialized laboratory equipment, this is not a single-test assay, which affects its accessibility and timeliness. A test based on lateral flow assay for antigen detection (GM-LFA, IMMY) is currently available and has shown similar analytical performance to GM-ELISA in preliminary studies. This methodology may represent a diagnostic alternative that would allow solving the limitations, facilitating faster decision making by treating physicians. Objective: To evaluate the concordance between GM-ELISA and GM-LFA methods for the detection of Aspergillus spp galactomannan in serum and bronchoalveolar lavage (BAL) samples. Methodology: Comparison study of diagnostic methods. Serum and ABL samples from patients with suspected aspergillosis referred to the Medical and Experimental Mycology Unit (CIB) in Medellin, Colombia, between 2021 and 2023 were used. Samples were processed following the manufacturers' instructions, both methodologies were performed simultaneously without prior knowledge of the results obtained and analyzed with cut-off points ≥ 0.5 and ≥ 1.0. Statistical analysis was performed by evaluating distribution tests, frequency tests and summary measures. In addition, concordance between methods was analyzed by kappa analysis and intraclass correlation coefficient (ICC). Results: A total of 241 samples, 125 were sera (52%) and 116 were LBA (48%). Of the total samples tested (n=241), 36/241 (15%) were positive by GM-ELISA, and 14/241 (6%) were positive by GM-LFA. Kappa values categorized as moderate 0.476 with a cutoff point of 0.5 and 0.569 with a cutoff point of 1.0 were obtained for serum and LBA samples with an ICC of 0.675. For serum samples with a cut-off point of 0.5 a kappa value of 0.676 was obtained and with a cut-off point of 1.0 a kappa value of 0.757 was obtained, categorized as considerable and good, respectively, with a CCI of 0.801. For LBA with a cut-off point of 0.5 a kappa value of 0.339 was obtained and 0.392 with a cut-off point of 1.0 categorized as low agreement, with a CCI of 0.316. Conclusion: The agreement between tests in serum samples was like that previously reported in other studies, with acceptable to good agreement for the detection of GM, while the behavior with LBA samples was contrary to what was expected, as a greater agreement between tests was expected. In relation to the cut-off point, it was expected to find differences between cut-off points, a slight improvement was observed with cut-off point ≥1.0 ODI for the different samples evaluated, without statistically significant differences.