Estandarización y evaluación de dos protocolos de extracción de proteínas en tres morfotipos de Aspergillus fumigatus

Abstract

RESUMEN: El género Aspergillus incluye cerca de 446 especies entre ellas Aspergillus fumigatus; un hongo patógeno oportunista ampliamente distribuido en el ambiente que se caracteriza por ocasionar cuadros de aspergilosis en pacientes inmunocomprometidos y cuadros alérgicos en personas inmunocompetentes. En este estudio se estandarizaron y evaluaron dos protocolos de extracción de proteínas adaptados de la literatura, a partir de tres morfotipos de de A. fumigatus ATCC 204305: conidias, swollen conidias e hifas. Los protocolos evaluados en este trabajo usaron una combinación de métodos químicos, mecánicos y enzimáticos que permitieron la extracción de una cantidad mayor de proteínas totales. Las proteínas extraídas fueron cuantificadas con el método de Bradford y posteriormente se observó la integridad de proteínas mediante una electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). El promedio de la cantidad de proteínas extraídas en 1x 108 células en el protocolo A fueron 15,06 µg, 25,18 µg, 41,6 µg en las conidias, swollen conidias e hifas, en cuanto al protocolo B, se extrajeron 65,023 µg en conidias, 133,310 µg en swollen conidias y 118,29 µg en hifas; así mismo en el SDS-PAGE, se observaron proteínas integras luego de la extracción. Este estudio hace un acercamiento a la unificación de los protocolos de extracción de proteínas en tres morfotipos.