Injertos óseos : nueva alternativa. Fase I. Extracción de proteínas morfogenéticas parcialmente purificadas de hueso bovino

Abstract

ABSTRACT: The purpose of this research was to extract from bovine bone and through physical and chemical procedures, Bone Morphogenetic Proteins (BMPs) partially purified, with high-quality osteoinduction characteristics, low antigenicity and high bioavailability. These proteins will be utilized as bone graft material. The procedure was performed through five basic steps: Milling the bovine bone, lipid extraction, demineralization, collagen extraction, obtention of the protein fraction. These steps were verified respectively through the following analysis: The Soxhlet method, Atomic Absorption for Calcium determination, Van Gieson Pycrofucsin Stain., Polyacrilamide Gel-Electrophoresis-Sodium- Duodecyl-Sulphate (PAGE-SDS). BMPs partially purified were obtained through Polyacrilamide Gel-Electrophoresis-Sodium-Duodecyl-Sulphate (PAGE-SDS., with molecular weights between 18 - 120 Kda, mainly bands at 18, 24, 34, 68, 72, 90 and 120 KDa, This material was lyophilized, packed and stored in a vacuum sealed narrow-neck bottle for posterior use.

RESUMEN: El propósito de esta investigación fue extraer a partir de hueso bovino y mediante procedimientos químicos, Proteínas Morfogenéticas Óseas (PMO), parcialmente purificadas que posean características osteoinductivas, de alta calidad, baja antigenicidad y alta biodisponibilidad, para ser utilizadas como material de injerto óseo. El procedimiento se llevó a cabo mediante cinco etapas básicas así: Molienda del material; extracción de lípidos; desmineralización; extracción del colágeno; obtención de la fracción proteica. Para verificar la efectividad de la desmineralización y demás procesos, se procedió como sigue: Método de Soxhlet; espectrometría de Absorción Atómica de Calcio; tinción de picrofucsina de Van Gieson; electroforesis en Gel de Poliacrilamida-Dodecil Sulfato Sódico. Se obtuvo un material con proteínas de peso molecular aparente en el rango de 18 a 120 KDa, principalmente en las bandas correspondientes a 18, 24, 34, 68, 72, 90, 120 KDa, mediante electroforesis en Gel de Poliacrilamida Dodecil Sulfato Sódico (SDS-PAGE) el cual fue liofilizado y almacenado en ampollas de vidrio selladas al vacío para su conservación y uso posterior