Modelling human skin: organotypic cultures for applications in toxicology, immunity, and cancer

Abstract

ABSTRATC: Animal models are important tools to better understand different skin processes. These are widely used for chemical hazard identification and to study skin-related pathologies. Despite the complexity they offer, animal skin is not a perfect model of human skin. This and the growing ethical concern about animal experimentation has led to the development of alternative methods that are in line with the 3 rules guidelines (reduction, refinement and replacement of animals in experiments) within the seventh amendment to the EU Cosmetics Directive 76/768/EEC. One of these alternatives are human skin explant models. Such models contain the main cellular components, a skin barrier function, and a mature stratum corneum, and are therefore highly suitable to replace animal testing. However, they rely on a regular supply of fresh tumor biopsies of proper size, limiting their use in drug testing assays. Another alternative, in vitro bi-dimensional (2D) skin models, have been produced as well, but they are restricted by the lack of similarity to the skin in vivo structure, phenotype, and behavior. Therefore, three-dimensional (3D) skin substitutes represent a powerful alternative to animal testing. Over the last years, many elegant studies have developed 3D models composed of human skin cells and extracellular matrix components. Still, most of them are limited to one cellular type, neglecting the contribution of other important elements like the dermis, the immune component, or interaction between different cell types. Therefore, to better understand skin behavior and responses, models that more faithfully mimic the human skin are needed. In this thesis, we aimed to develop 3D fibrin-based human skin equivalents for applications in the fields of toxicology, immunology, and cancer, containing both the dermal and epidermal compartments.

RESUMEN: Los modelos animales son herramientas importantes para el estudio de la biología de la piel humana y los mecanismos subyacentes. A pesar de la complejidad que ofrecen y de ser ampliamente utilizados para estimar el riesgo potencial de sustancias químicas e investigar diferentes patologías cutáneas, no son modelos perfectos de piel humana. Esto y la creciente preocupación ética por la experimentación animal ha dado lugar al desarrollo de métodos alternativos que estén en línea con el principio de las 3R (reducción, refinamiento y reemplazo de animales de laboratorio) dentro de la séptima enmienda a la Directiva de Cosméticos de la UE 76/768/EEC. Los explantes de piel humana contienen los principales componentes celulares, conservan la función barrera de la piel y presentan un estrato córneo maduro, por lo que son altamente adecuados como reemplazo de pruebas con animales. Sin embargo, tienen como principal desventaja la necesidad de contar con un suministro constante de biopsias frescas de tamaño adecuado, lo que limita su uso en pruebas de toxicidad. Asimismo, se han producido varios modelos de piel in vitro bidimensionales (2D) que sin embargo, están limitados por la falta de similitud con la estructura, fenotipo y función de la piel nativa. Por otro lado, los modelos de piel tridimensionales (3D) representan una poderosa alternativa contra la experimentación animal. En los últimos años, diferentes estudios se han enfocado en el desarrollo de sustitutos 3D compuestos por células de piel humana y productos de la matriz extracelular. No obstante, la mayoría sólo incluye un tipo celular, pasando por alto la contribución de elementos importantes como la dermis, el componente inmunológico o la interacción entre diferentes tipos de células. Por lo tanto, para un mejor estudio de la piel y sus respuestas, se necesitan modelos que imiten más fielmente la piel humana. En esta tesis, nos enfocamos en el desarrollo de modelos dermo-epidérmicos 3D de piel humana para aplicaciones en el campo de la toxicología, la inmunología y el cáncer, utilizando como soporte un scaffold de fibrina.