Molecular cloning and characterization of two hsp 70 homologous genes from the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis

Abstract

ABSTRACT : Paracoccidioides brasiliensis, a dimorphic fungus, is the etiologic agent of Paracoccidioidomycosis (PCM), one of the most important systemic mycosis in Latin America. Two genes (2.2 and 1DB5) were cloned, characterized and sequenced; they showed homology with members of hsp70 gene family. By using several probe fragments derived from these genes, levels of expression for each gene were determined by Northern blot during transition to the yeast phase. The highest level of hsp70 transcript occurred between 30 min to 6 hours after temperature shift, with significant reduction after 36-48 hours. However, after 72 hours, the level of the transcription increased until yeast phase was reached. As a response to temperature increase, hsp 70 genes are expressed during the transition phase and possibly play a role in the differentiation process.

RESUMEN : Paracoccidiodes brasiliensis es el agente etiológico de la Paracoccidioidomicosis (PCM), una de las micosis sistémicas mas importantes en Latinoamérica. Dos genes hsp70 (Clones 2.2 y 1DB5) fueron clonados, caracterizados y secuenciados. El análisis de secuencia mostró que los clones 2.2 y 1DB5 poseen una alta homología con la familia de genes de choque térmico hsp70. Mediante la utilización de fragmentos de ADN provenientes de ambos clones, se determinó la expresión por Northern blot durante la fase de transición a levadura. Nosotros encontramos los niveles mas altos de transcriptos ocurre entre los 30 min y 6 h después de cambiar la temperatura a 37°C. Entre las 36 y 48 h, se reducen los niveles de ARNm. Sin embargo, los niveles de ARNm aumentan a las 72 h hasta alcanzar la fase de levadura. Como resultado del aumento de la temperatura durante la fase de transición micelio a levadura, se incrementa la expresión de genes hsp70 sugiriendo que las proteínas de choque térmico tienen un papel durante el proceso de diferenciación.