Efectos sobre el ciclo celular de extractos de Euphorbia aphylla

Abstract

RESUMEN: Durante las dos últimas décadas, una gran diversidad de especies del género Euphorbia han sido química y biológicamente estudiadas debido a la riqueza de evidencias etnofarmacológicas reportadas en el mundo (tabla 1). En consecuencia, y teniendo en cuenta las tradiciones de medicina tradicional en Colombia, en este trabajo se evaluó la actividad biológica inhibitoria de extractos y látex de E. aphylla sobre la proliferación celular in vitro de células CHO(HB4-KI), con énfasis en el flujo del ciclo celular desde la fase S (tardia) hasta la fase M. Se recolectaron muestras de cuerpos basales (tallos) de E. aphylla (registro RC-11832, Herbario Universidad de Antioquia, Medellin, Colombia). El material secado se molió y se sometió a extracción continua con éter de petróleo y etanol (200 g/l). Los extractos se rotaevaporaron y redisolvieron en agua/tween-20 (1:10) y DMSO puro, respectivamente. El látex crudo también fue disuelto en DMSO. La citotoxicidad de los dos extractos y del látex, y sus solventes, se evaluó mediante la prueba de rojo neutro, en microplatos de 96 pozuelos, 15.000 células CHO/pozo y cuatro diluciones por extracto o solvente. Posteriormente se realizaron las pruebas de ciclo celular en cultivos exponenciales de células CHO mediante el análisis de la cinética de acumulación en mitosis (función de acumulación). Las tres mezclas mostraron baja citotoxicidad, aun a concentraciones máximas. Ninguna de las tres mostró actividad bloqueadora a nivel de la fase M. Sin embargo, el análisis de las gráficas de cinética acumulativa hacia la fase M indica que el extracto etéreo bloquea el ciclo celular antes de la fase M, posiblemente al final de la fase G, o inhibe el tránsito G.-M. El extracto etanólico también produce considerable inhibición o retraso del flujo de G, hacia M, pero no genera bloqueo total, como si lo hace el extracto etéreo. De otro lado, el látex crudo, aunque reduce el indice mitótico (IM) durante las tres primeras horas del tratamiento, muestra recuperación posterior del IM esperado.

ABSTRACT: World wide ethnopharmacological data have reveaced great diversity of Euphorbia species, which hale have been biologically and chemically studied during the last two decades (table 1). Consequently, and in view of the evidence gathered from traditional medicine in Colombia, this stuor evaluated chemical extracts and latex from E. aphylla for their potential inhibitory action on in vitro cell proliferation, with emphasis on cell cycle progresion through the G, M phases. Stem samples from E.aphylla were collected (registry No. RC-11832, University of Antioquia Herbarium), dried, shreaded and chemically extracted with petroleum ether and ethanol (at 200 g/1). The extracted material was roto evaporated and redisolved with water:tween20 (1:10) or DMSO (100%). Crude latex was also disolved in DMSO. Cytotoxicity of the three mixtures, their solvents, and four dilutions of each were evaluated with neutral-red stain, using 96-well microplates, and 15000 CHO cells /well. After these assays, cell cycle tests were performed on exponentially growing CHO cultures, through the analysis of accumulation kinetics of mitoses. Results indicated low cytotixicity of the three extracts, even at maximum concentration. Similarly, none showed M-phase blocking activity. The analysis of cell cycle effect clearly indicated that the ether-extract blocks the cell cycle before M-phase, apparently at the end of G,, or by inhibiting the progression from G, to M. The ethanolic extract also produced considerable inhibition or delay of the G, to M flux, but not generate a complete halt, like the ether-extract. On the contrary, crude latex decreasen the mitotic index (MI) at the beginnning of the treatment, but a delayed recovery of the expected MI was later observed.