Extracción, cuantificación y distribución de las principales fracciones lipídicas en pequeñas biopsias de hígado de vacas en el periodo de transición

Abstract

RESUMEN: Existen dificultades para conocer los cambios en la distribución de las principales fracciones lipídicas en el hígado de las vacas lecheras debido a la necesidad de técnicas invasivas para su muestreo y de cantidades relativamente grandes de muestra para su análisis. El objetivo de esta investigación fue integrar un método para la extracción de lípidos totales (LT) con la determinación enzimática de sus diferentes fracciones en pequeñas biopsias. Biopsias hepáticas provenientes de 60 vacas Holstein en el periodo de transición (entre el día 270 de gestación y 20 posparto) fueron sometidas a la extracción de LT utilizando una mezcla Hexano-Isopropanol. Los LT obtenidos fueron disueltos en hexano, varias alícuotas de diferentes volúmenes fueron utilizados para la determinación enzimática de: triglicéridos (TG), fosfolípidos (FL), Colesterol total (CT) y Ácidos Grasos Libres (AGL). La cantidad de muestra hepática utilizada fue 49.6 mg ±18.45mg (Media ± Desviación estándar). El promedio de LT fue 7.20%. El coeficiente promedio de variación (CV) en la extracción de LT fue 7,62%. Los TG, FL, CT y AGL representaron el: 52,5%; 18,30%; 19,30% y 0.41% de los LT respectivamente. Los CV para las determinaciones enzimáticas de TG, FL, CT y AGL fueron: 5,2%; 9,9%; 6,1% y 4,0% respectivamente, indicando que la determinación de las principales fracciones lipídicas en pequeñas biopsias de hígado se puede realizar de manera confiable a partir de una única muestra. Se observó un coeficiente de correlación alto entre: LT y TG (0,96); mientras que para LT y FL fue de -0,42; y para LT y CT de -0,62; lo que indicó que el aumento en los lípidos hepáticos ocurrió principalmente en la fracción TG, y en consecuencia presentó una disminución relativa en la fracciones FL y CT.

ABSTRACT: There are difficulties in understanding changes in the distribution of the major lipid fractions in the liver of dairy cows due to the need for invasive techniques for sampling and relatively large quantities of sample needed for analysis. The objective of this research was to integrate a method for extracting total lipid (TL) with the enzymatic determination of its fractions in small biopsies. Liver biopsies from 60 Holstein cows in the transition period (between day 270 of gestation and 20 postpartum) underwent TL extraction using Hexane-Isopropanol mixture. TL obtained was dissolved in hexane, several aliquots of different volumes were used for the enzymatic determination of: triglycerides (TG), phospholipids (PL), total cholesterol (TC) and free fatty acids (FFA). The amount of liver sample used was 49.6 mg ± 18.45mg (Mean ± Standar Deviation). The average was 7.20% TL. The average coefficient of variation (CV) in TL extraction was 7.62%. TL. TG, PL, TC and FFA represented 52.5%; 18.30%; 19.30% and 0.41% respectively of the TL. CV for enzimatic determinations of TG, PL, TC and FFA were: 5.2%; 9.9%; 6.1% and 4.0% respectively, indicating that this method is suitable for determination of lipid fractions in small liver samples. High correlation coefficient was observed between TL and TG (0.96); while for TL and PL was -0.42; and for TL and TC -0.62; It is indicating that the increase in hepatic lipid occurred mainly in the TG fraction and consequently showed a relative decrease in the fractions PL and TC.