Modulación de la expresión de la L-selectina por agentes quimiotácticos y GM-CSF

Abstract

RESUMEN: La L-selectina es una molécula de adhesión que se expresa constitutivamente en la membrana de los granulocitos, monocitos y linfocitos, células en las cuales interviene en los procesos iniciales de migración hacia los sitios de inflamación y órganos linfoides. Una vez que dichas células son activadas, la L-selectina experimenta un proceso de regulación negativa con la liberación de un fragmento soluble. Con el objetivo de analizar el efecto de algunos agentes quimiotácticos fisiológicos y un estimulante artificial sobre la expresión de la L-selectina en la superficie de los granulocitos de sangre periférica, se evaluó ésta por citometría de flujo en leucocitos no estimulados y luego de su incubación con un éster de forbol (PMA), dos agentes quimiotácticos (fMLP y LTB4) y una citocina (GM-CSF). En condiciones basales, la expresión de la L-selectina se encontró en un porcentaje alto (95,03 ± 0,67); la estimulación con PMA indujo una disminución notable en la expresión de esta molécula (3,16 ± 0,63). Los factores quimiotácticos llevaron también a una reducción significativa (69,89 ± 4,96 para LTB4 y 53,70 ± 4,30 para fMLP), mientras que la incubación con GM-CSF no produjo cambios significativos con respecto a la expresión basal (89,08 ± 4,81). Al comparar las diferentes condiciones de estimulación entre ellas, se observó que el efecto del PMA fue significativamente mayor que los demás estímulos; además, cuando se comparó la reducción de la expresión generada por el fMLP y el LTB4 también se encontró que entre ellas existía una diferencia estadísticamente significativa. Estos resultados sugieren que el grado de activación alcanzado por los granulocitos se relaciona directamente con la capacidad para liberar la L-selectina desde su superficie, siendo ésta menos intensa después de la acción de estímulos fisiológicos como los agentes quimiotácticos; si bien el GM-CSF activa funciones importantes en la fisiología de los granulocitos, no induce la pérdida de la L-selectina desde la membrana celular.

ABSTRACT: L-selectin is an adhesion molecule with constitutive expression located on the membrane of granulocytes, monocytes and lymphocytes. It is involved in the early stages of migration of these cells toward either the sites of inflammation or lymphoid tissues. After the cells are activated, Lselectin is down-regulated with shedding of a soluble fragment. Flow cytometry was used to measure L-selectin expression levels on the granulocyte surface, after incubation with a phorbol esther (PMA), two chemotactic factors (fMLP and LTB4) and a cytokine (GM-CSF). Under basal conditions, the expression of L-selectin was found in a high percentage (95.0 ± 0.7) of granulocytes; PMA stimulation led to a marked decrease in expression (3.2 ± 0.6). Chemotactic factors also led to a significant decrease in L-selectin expression (69.9 ± 5.0 for LTB4, and 53.70 ± 4.3 for fMLP), whereas the incubation with GM-CSF produced no significant changes (89.1 ± 4.8). When all the conditions were compared, the PMA effect was significantly higher than those observed with other stimuli; furthermore, the expression upon incubation with fMLP and LTB4 was statistically significant. These results suggest that the level of activation reached by granulocytes is directly related to their capacity for shedding L-selectin from the cell surface, and that these levels are lowered after the stimulation by chemotactic factors. GM-CSF activates several important functions of granulocyte cells, however it does not induce L-selectin shedding.